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化學(xué)發(fā)光酶免疫測(cè)定
更新時(shí)間:2011-12-05   點(diǎn)擊次數(shù):1447次

 
化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定(chemiluminesent immunoassay,CLIA)是免疫測(cè)定技術(shù)繼酶免技術(shù)(EIA)、放免技術(shù)(RIA)、熒光免疫技術(shù)(FIA)和時(shí)間分辨熒光免疫技術(shù)(TRFIA)之后發(fā)展的一項(xiàng)新興測(cè)定技術(shù)。其
基本原理是將化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)與免疫反應(yīng)相結(jié)合,以檢測(cè)樣本中的抗原或抗體,由于它既具有免疫反應(yīng)的高度特異性,又具有發(fā)光反應(yīng)的高敏感性,且對(duì)環(huán)境公害小,因此近年來(lái)已被國(guó)內(nèi)外臨床實(shí)驗(yàn)室及科研單位,廣泛應(yīng)用于各種激素、特種蛋白及藥物的監(jiān)測(cè)和分析。

化學(xué)發(fā)光分析技術(shù)根據(jù)其標(biāo)記物的不同可大致分為3大類(lèi):化學(xué)發(fā)光酶免疫測(cè)定、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫測(cè)定、電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定。

化學(xué)發(fā)光酶免疫測(cè)定(chemiluminescent enzyme immunoassay,CLEIA)從標(biāo)記物性質(zhì)來(lái)看應(yīng)屬酶免疫測(cè)定。CLEIA測(cè)定中的兩次抗原抗體反應(yīng)步驟均與酶免疫測(cè)定相同,僅zui后一步酶反應(yīng)所用的底物為發(fā)光劑而非顯色劑。CLEIA中常用的兩種標(biāo)記酶是HRP和ALP,其原理如下。

(一)HRP標(biāo)記的CLEIA
HRP標(biāo)記的CLEIA常用的底物為魯米諾或其衍生物。魯米諾的氧化反應(yīng)在堿性緩沖液中進(jìn)行,通常以pH8.6的0.1mol/LTrig緩沖液作底物液,當(dāng)HRP與魯米諾在堿性環(huán)境下發(fā)生氧化反應(yīng)時(shí),魯米諾將能量轉(zhuǎn)移并zui終以發(fā)射光子的形式釋放,而光的強(qiáng)度與被測(cè)物的濃度成正比;此外,HRP催化魯米諾氧化的反應(yīng)可被某些酚試劑(如鄰碘酚)或螢火蟲(chóng)熒光素酶等加強(qiáng)。加強(qiáng)劑的作用是增強(qiáng)發(fā)光和延長(zhǎng)發(fā)光時(shí)間,由此可提高檢測(cè)的敏感度。

(二)ALP標(biāo)記的CLEIA
在以ALP為標(biāo)記酶的CLEIA中,應(yīng)用的底物一般為adamantyl dioxetase phosphate及其衍生物如PPD等。當(dāng)ALP與底物相互作用時(shí),ALP使底物由能量基態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài),當(dāng)非穩(wěn)態(tài)的底物以光子形式將能量轉(zhuǎn)移,并回到基態(tài)時(shí),其發(fā)光的強(qiáng)度則與被測(cè)物的濃度成正比,因此測(cè)定反應(yīng)產(chǎn)物的發(fā)光強(qiáng)度即可獲得被測(cè)物的濃度。

 

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