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ELISA實驗前的準備
更新時間:2019-04-01   點擊次數:1662次

ELISA實驗前的準備

1,仔細閱讀說明書

2,承認試劑盒在有效期內

3,按說明書承認全部試劑*(數量、體積)

4,標本制備要標準,每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份。短期內無法實驗者,留意低溫保存

5,準備好全部實驗額定所需物品,如試管、吸頭、移液器、離心機等

6,根據檢測標本數量承認所需試劑的量

7,按說明書將所用試劑平衡至室溫,配制所需試劑 DIY夾心法ELISA常見技能攻略

8,選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進行配對;若選擇兩個單抗,有必要辨認不同表位的抗體;好從同一家公司選擇抗體對。

9,ELISA實驗中為了承認佳信號和低布景應將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預實驗中進行彼此相抗的滴定。一起,應包括在恰當規(guī)劃內的標準品的系列稀釋。按試劑說明書慣例提供的規(guī)劃進行操作。

10,標準品的配制:對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書,留意每批的細節(jié)。在運用細胞因子前,瞬時離心試劑瓶,盡可能多地收回其間的細胞因子。根據每批說明書中的細節(jié),將凍干的細胞因子復溶。

11,一般待測抗原標準曲線的線性規(guī)劃的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml??衫脴藴实腅LISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改動酶底物系統(tǒng)可在必定規(guī)劃內提高靈敏度。

12,為了優(yōu)化靈敏度,建議過夜孵育標準品和標本。

13,若運用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng),應制止在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。

14,當測定混合液體中的抗原時,如血清,建議在標本稀釋液中加不相干的Ig.

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